Alexa Fluor 488 Phalloidin

Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽

產品標簽

Phalloidin鬼筆環肽；F-actin肌動蛋白（聚合）；G-actin球形肌動蛋白（單體）；Actin Polymerization肌動蛋白聚合；Cytochalasin細胞松弛素；CAS NO.：17466-45-4；

產品信息

【溫馨提示】：見我司整理的鬼筆環肽及衍生物（Phalloidin andPhalloidin Conjugates）產品專題。

產品描述

鬼筆環肽（Phalloidin），又稱鬼筆鵝膏素，最初是從毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到的一種七肽毒素，以ji高的親和力和特異性結合肌動蛋白絲F-actin（聚合形式的肌動蛋白），不會結合單體肌動蛋白（G-actin）。不像肌動蛋白抗體，同時識別單體和聚合形式的肌動蛋白。

鬼筆環肽對大小纖維的親和力相近，在許多不同的動植物物種的肌肉和非肌肉細胞中，基本都按照一個肌動蛋白亞基與一個鬼筆環肽分子的化學計量比結合。不像肌動蛋白抗體，對不同物種或來源的肌動蛋白親和力會發生明顯變化。鬼筆環肽的非特異性結合幾乎可忽略，染色和未染色區域的差異極其明顯。

鬼筆環肽使得肌動蛋白聚合/解離的臨界濃度降至1μg/ml，可用作一種聚合增強劑。另外，產生的復合物高度穩定（解離常數約3×10–8M），能夠抑制細胞松弛素、碘hua鉀和溫度上升引起的去聚合和去組裝活性。

鬼筆環肽及其衍生物在納摩爾濃度即可對F-actin染色，且水溶性良好，是非常實用和方便的探針，對組織切片、細胞培養物或無細胞體系內的F-actin進行定性和定量研究。另外，鬼筆環肽及其衍生物很小，直徑約12–15 ?，分子量<2000 Da，經標記后的F-actin仍維持許多標記前的功能。比如，標記的甘油抽提肌纖維仍能收縮；標記的肌動蛋白絲仍能在固相肌球蛋白基質中移動。

本品為Alexa Fluor 488熒光標記的鬼筆環肽（Alexa Fluor 488-Phalloidin），以溶于DMSO的儲存液形式提供，按照100µl/孔（96孔板），總共可做300次。

產品特點

1） 選擇性染色F-actin，優于抗體染色法，具更高的特異性和更低的非特異背景。

2） 優秀的熒光亮度和穩定性，類同于Dylight 488-Phalloidin，Ex/Em=492/518。

3） 優化用于固定和透化處理樣本。

4） 適用于多重標記應用，與其他熒光染料包括熒光蛋白、Qdot熒光納米晶和其他包括二抗在內的熒光偶聯物完quan兼容。

保存與運輸方法

保存：-20℃避光干燥保存，1年有效。 

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 本品具有一定的毒性，LD50=2mg/kg，操作時請注意防護。

2） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作流程（免疫熒光染色）

有幾種方法都能用來染色組織細胞培養物內的肌動蛋白絲（F-actin）染色，其中，固定步驟在獲得可信且具代表性的細胞F-actin分布情況中至關重要。固定步驟基于實驗自身需求來選擇。多聚甲醛或戊二醛都能得到優秀的F-actin染色和良好的板狀偽足維持保存。

一、 實驗材料準備

1.1 Alexa Fluor 488 Phalloidin（Cat# MX4416）

1.2 1×PBS Buffer（pH 7.4）, for Cell Culture（Cat# SH30256.01）

1.3 固定液（溶于PBS的4%多聚甲醛，pH 7.0）（Cat# MM1504）

1.4 破膜液（溶于PBS的0.5% Triton X-100）

1.5 （可選）抗熒光淬滅劑（Cat# MM1401）

1.6 （可選）即用型DAPI染色液（Cat# MX4209）

1.7 （可選）BSA, Standard Grade（Cat# MP6101）

1.8 黑框/透明底的96孔細胞培養板

二、 染色工作液準備

2.1于實驗前將低溫保存的Alexa Fluor 488 Phalloidin置于室溫回溫至少20min，低速離心后才開瓶。第一次使用請將本品按照單次用量進行分裝，置于-20℃避光保存，一年穩定。

2.2本品以1000×DMSO儲存液形式提供。開始實驗前，使用1×PBS Buffer（pH 7.4）將其稀釋到1×染色工作液（比如1µl儲存液加入1ml PBS Buffer），用槍吹勻即可。

【注①】：以96孔板為檢測體系，按照100µl/孔來計算，準備足量的染色工作液；也可對細胞爬片進行染色，但需調整染色工作液的用量，以能覆蓋住細胞為準。

【注②】：最佳的工作濃度和孵育時間取決于特定的應用。根據特定的細胞類型和/或細胞/組織對探針的通透性來調整合適的染色條件。

【注③】：可使用含1% BSA的PBS Buffer稀釋儲存液，能夠降低非特異背景染色，也能最小化鬼筆環肽粘附到管壁的可能性。

【注④】：染色工作液現配現用，室溫避光保存。

三、 染色流程（以96孔板為例）

3.1用黑框/透明底的96孔板進行細胞培養，使其貼壁生長達到70-80%的匯合度。

3.2吸掉培養液，用37℃預熱的1×PBS Buffer（pH 7.4）清洗細胞2次。

3.3用溶于PBS的4%多聚甲醛固定細胞，室溫固定10-30min。【注意】：固定過程中甲醇能破壞肌動蛋白，因此，固定液中最好避免接觸任何甲醇。zuihao的固定液是無甲醇的甲醛。

3.4用1×PBS Buffer清洗細胞2-3次，室溫下30s/次。

3.5用破膜緩沖液透化細胞，室溫處理5min。

3.6用1×PBS Buffer清洗細胞2-3次，室溫下30s/次。

3.7取100μl現配的AlexaFluor 488 Phalloidin染色工作液到每個孔內，室溫避光孵育30-90min。

【注意】：若有需要，此時可加入即用型DAPI染色液或其他不同于AlexaFluor 488熒光光譜的細胞核染色液。

3.8用1×PBS Buffer清洗細胞2-3次，室溫下30s/次。

3.9加抗熒光淬滅劑（如Fluoromount-GTM，Cat# MM1401）到孔內保護熒光。

3.10熒光顯微鏡下觀察染色結果，選擇AlexaFluor 488激發/發射濾片（Ex/Em=492/518nm）。若做細胞核染色，選擇合適濾片，比如DAPI激發/發射濾片（Ex/Em=364/454nm）。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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